产品简介:
MG02是谱璟科技针对细胞核定位蛋白质(nucleus-localized protein)开发的质谱级Co-IP相互作用筛选的试剂盒。该试剂盒可高效进行质谱级、核定位蛋白质的Co-IP样本制备。
制备的Co-IP样本进行SDS-PAGE电泳和考染,通过与对照组相比,切割目的蛋白(Bait)和其他差异条带,进行蛋白质胶内酶解和后续的质谱检测分析,筛选潜在的互作蛋白。
保存条件:
-80°C,一年有效。
注意事项:
蛋白酶和磷酸酶抑制剂需用户自备。
台式离心机(>16000g,含制冷功能)需用户自备。
旋转混合仪需用户自备或咨询我司购买(产品链接)。
本产品仅对细胞系样本进行了优化,未对组织样品进行测试,请用户知悉。
请用户使用产品说明书中提供的3×FLAG标签序列构建过表达质粒。
质粒转化、转染级别质粒抽提等全套试剂需用户自备。
一次性针头注射器(5、10、20ml)、0.45μm一次性注射针头滤器需用户自备。
5ml、15ml离心管需用户自备。
SDS-PAGE电泳、western blot系统及考马斯亮蓝染色等需用户自备。
超纯水/系统需用户自备。
本产品仅供科研使用!
实验数据(该试剂盒可进行2组、2次质谱级Co-IP样本的制备):
MG02进行细胞核定位蛋白质的质谱级Co-IP样品制备。我司开发了2种质谱级Co-IP洗涤缓冲液(Buffer A & Buffer B)。Buffer A为温和性洗涤液,可保留弱的和动态的互作。Buffer B为较强的洗涤液,可保留强相互作用。Co-IP的对照组几乎观察不到非特异性粘附蛋白。
更多事项:
上述为普通的质谱级Co-IP实验数据,差异条带进行质谱检测后,仅能提供定性信息,无法区分特异性和非特异性互作。故而,需研究者自行挑选潜在互作蛋白质进行Co-IP结合WB验证(可选择我司产品:W02)。
我司更推荐使用SILAC技术(我司SILAC产品链接)结合MG02进行快速的互作蛋白筛选(~几十个)。
样品质谱检测可委托我司进行相应的检测分析。如用SILAC结合MG02,我司可对质谱数据进行完整的分析包括(1)提供完整的数据分析图表。(2)潜在的特异性互作蛋白列表。
MG02可用于瞬转细胞或者稳定细胞株样品的质谱级Co-IP样本制备。
对于制备质谱级Co-IP样品,我司推荐用SDS-PAGE胶分离、考染观察并切割bait蛋白及其他差异条带进行质谱检测。不推荐直接进行digest on-beads方式进行后续质谱检测分析。