简介:
Copper-Catalyzed Azide−Alkyne Cycloaddition (CuAAC) 是典型的Click Chemistry Reaction。CuAAC是在温和的反应条件下,通过Cu(I)离子催化,实现炔烃(Alkyne)和叠氮(Azide)化合物的共价反应。
鉴于CuAAC技术所涉及到的炔烃(Alkyne)和叠氮(Azide)都很小,故而被广泛使用于小分子化合物(Small Molecule,SM)在细胞/组织中的靶点蛋白质发现和筛选。简言之,(1)将目的SM用炔烃(Alkyne)标记,制备成“钓取”靶点蛋白的“探针(Probe)”,(2)将Probe与细胞/组织的提取蛋白质进行孵育,让Probe与其靶点蛋白结合;(3)向(2)的反应体系中加入包含biotin标记的叠氮(Biotin-Azide)的Click mix,使得Biotin-Azide通过CuAAC反应,与Probe上的炔烃(Alkyne)共价结合。(4)再向(3)的反应体系中加入streptavidin-beads,去捕获/富集“靶点蛋白-Probe-Azide-Biotin”复合物,(5)最后对捕获/富集的蛋白复合物进行质谱鉴定和定量分析,筛选Probe的潜在特异性靶点蛋白。
将CuAAC技术与SILAC (Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)质谱系统(LC-MS)多技术平台结合,可在细胞系体系中,精确、快速的筛选和发现SM的潜在特异性靶点蛋白。
注意事项:
炔烃(Alkyne)标记的SM需用户自行合成。用户亦可委托我司进行定制服务。
MG06是基于CuAAC的试剂盒,仅供科研使用!
推荐使用MG06试剂盒结合SILAC技术(我司SILAC产品链接),在细胞系体系中鉴定和筛选SM的靶点蛋白。
MG06对于组织样品的靶点蛋白筛选,我司目前未做优化,请用户知悉。
细胞裂解及破碎装置如超声破碎仪(如宁波新芝SCIENTZ-48,可联系我司进行购买)或其他品牌破碎仪需用户自备。
其他品牌的破碎仪,破碎条件需用户使用MG06提供的裂解液进行细胞蛋白质提取优化。提取蛋白质后,可通过SDS-PAGE电泳和考染观察/鉴定蛋白质提取情况和效率。
蛋白质BCA定量试剂盒/仪器、蛋白质电泳及Western blot系统、小型台式离心机(含预冷功能)、丙酮和甲醇需用户自备。
产品包装:
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 数量 | 备注 |
MG06-1 | Click-Cell lysis buffer | 100ML | 1 | |
MG06-2 | Click mix | 100μL | 2 | 满足10次click反应 |
MG06-3 | Resuspension Buffer | 20ML | 1 | |
MG06-4 | Streptavidin-beads | 1ML (50% slurry beads) | 1 | |
MG06-5 | Wash Buffer A (WA) | 100ML | 2 | |
MG06-6 | Wash Buffer B (WB) | 100ML | 2 | |
MG06-7 | 5×SDS-PAGE loading buffer | 1ML | 1 | |
MG06-8 | Streptavidin-HRP | 100μL | 1 | |
MG06-9 | Biotin-labeled BSA | 50μL | 1 | |
MG06-10 | Sample Concentrated tube | 0.5ML | 10 |