MG06:小分子-蛋白质Pull-down试剂盒(Click tag,质谱级)

  • 简介:

  1. Copper-Catalyzed Azide−Alkyne Cycloaddition (CuAAC) 是典型的Click Chemistry Reaction。CuAAC是在温和的反应条件下,通过Cu(I)离子催化,实现炔烃(Alkyne)和叠氮(Azide)化合物的共价反应。

  2. 鉴于CuAAC技术所涉及到的炔烃(Alkyne)和叠氮(Azide)都很小,故而被广泛使用于小分子化合物(Small Molecule,SM)在细胞/组织中的靶点蛋白质发现和筛选。简言之,(1)将目的SM用炔烃(Alkyne)标记,制备成“钓取”靶点蛋白的“探针(Probe)”,(2)将Probe与细胞/组织的提取蛋白质进行孵育,让Probe与其靶点蛋白结合;(3)向(2)的反应体系中加入包含biotin标记的叠氮(Biotin-Azide)的Click mix,使得Biotin-Azide通过CuAAC反应,与Probe上的炔烃(Alkyne)共价结合。(4)再向(3)的反应体系中加入streptavidin-beads,去捕获/富集“靶点蛋白-Probe-Azide-Biotin”复合物,(5)最后对捕获/富集的蛋白复合物进行质谱鉴定和定量分析,筛选Probe的潜在特异性靶点蛋白。

  3. 将CuAAC技术与SILAC (Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)质谱系统(LC-MS)多技术平台结合,可在细胞系体系中,精确、快速的筛选和发现SM的潜在特异性靶点蛋白。

  • 注意事项:

  1. 炔烃(Alkyne)标记的SM需用户自行合成。用户亦可委托我司进行定制服务。

  2. MG06是基于CuAAC的试剂盒,仅供科研使用!

  3. 推荐使用MG06试剂盒结合SILAC技术(我司SILAC产品链接),在细胞系体系中鉴定和筛选SM的靶点蛋白。

  4. MG06对于组织样品的靶点蛋白筛选,我司目前未做优化,请用户知悉。

  5. 细胞裂解及破碎装置如超声破碎仪(如宁波新芝SCIENTZ-48,可联系我司进行购买)或其他品牌破碎仪需用户自备。

  6. 其他品牌的破碎仪,破碎条件需用户使用MG06提供的裂解液进行细胞蛋白质提取优化。提取蛋白质后,可通过SDS-PAGE电泳和考染观察/鉴定蛋白质提取情况和效率。

  7. 蛋白质BCA定量试剂盒/仪器、蛋白质电泳及Western blot系统、小型台式离心机(含预冷功能)、丙酮和甲醇需用户自备。

  • 产品包装:

产品编号
产品名称规格
数量备注
MG06-1
Click-Cell lysis buffer
100ML
1
MG06-2Click mix100μL2满足10次click反应
MG06-3Resuspension Buffer20ML1
MG06-4Streptavidin-beads1ML (50% slurry beads)1
MG06-5Wash Buffer A (WA)100ML2
MG06-6

Wash Buffer B (WB)

100ML2
MG06-7
5×SDS-PAGE loading buffer1ML1
MG06-8Streptavidin-HRP100μL1
MG06-9Biotin-labeled BSA50μL1
MG06-10Sample Concentrated tube0.5ML10


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