产品简介:
Co-IP(免疫共沉淀)结合质谱(LC-MS)筛选靶蛋白(Bait)的相互作用蛋白是目前主流的技术方案。然而,质谱级别的Co-IP样品制备跟WB(western blot)级别的样品制备不是同一层次的流程。质谱级别的Co-IP样品制备更加复杂,对技术要求很高。
谱璟科技基于其在分子互作研究领域的技术积累,开发了细胞质定位靶蛋白(cytoplasmic localization)Co-IP质谱级试剂盒,使用该试剂盒可制备满足质谱鉴定/定量筛选的Co-IP,助力研究者找到Bait的新相互作用蛋白,为Bait的深入分子机理解析提供扎实的数据支撑。
保存条件:
-80°C保存,一年有效。
注意事项:
蛋白酶和磷酸酶抑制剂需用户自备。
台式离心机(>16000g,含制冷功能)需用户自备。
旋转混合仪需用户自备或咨询我司购买(产品链接)。
本产品仅对细胞系样本进行了优化,未对组织样品进行测试,请用户知悉。
请用户使用产品说明书中提供的3×FLAG标签序列构建过表达质粒。
质粒转化、转染级别质粒抽提等全套试剂需用户自备。
一次性针头注射器(5、20、50ml)、0.45μm一次性注射针头滤器需用户自备。
5ml、15ml离心管需用户自备。
SDS-PAGE电泳、western blot系统及考马斯亮蓝染色等需用户自备。
超纯水/系统需用户自备。
本产品仅供科研使用!
产品包装 (该试剂盒可进行2组、2次质谱级Co-IP样本制备):
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品数量 |
MG01-1 | Positive control plasmid | ~5μg | 1 |
MG01-2 | 细胞裂解液(MS Grade) | 100ML | 1 |
MG01-3 | 洗涤缓冲液(MS Grade) | 100ML | 1 |
MG01-4 | Control Magnetic beads | 5ML(50% slurry beads) | 1 |
MG01-5 | anti-FLAG Magnetic beads | 1ML (50% slurry beads) | 1 |
MG01-6 | 3×FLAG peptide (3FP) | 100μL | 2 |
MG01-7 | 3FP稀释缓冲液 | 10ML | 1 |
MG01-8 | 样品浓缩管 | 个 | 8 |
MG01-9 | 5×SDS-PAGE上样缓冲液 | 1ML | 1 |
EQ01 | 多功能磁力架 | 个 | 1 |
— | 说明书(含3×FLAG标签序列) | 份 | 1 |
实验数据:
MG01制备细胞质定位蛋白的质谱级Co-IP样品。Bait是Co-IP的靶蛋白,该蛋白质为细胞质定位蛋白。与对照组相比,Bait蛋白富集明显,同时有多个差异条带(*标注)。可将bait蛋白与差异条带分别切下进行质谱检测。
更多事项:
上述为普通的质谱级Co-IP实验数据,差异条带进行质谱检测后,仅能提供定性信息,无法区分特异性和非特异性互作。故而,需研究者自行挑选潜在互作蛋白质进行Co-IP结合WB验证(可选择我司产品:W02)。
我司更推荐使用SILAC技术(我司SILAC产品链接)结合MG01进行快速的互作蛋白筛选(~几十个)。
样品质谱检测可委托我司进行相应的检测分析。如用SILAC结合MG01,我司可对质谱数据进行完整的分析包括(1)提供完整的数据分析图表。(2)潜在的特异性互作蛋白列表。
MG01可用于瞬转细胞或者稳定细胞株样品的质谱级Co-IP样本制备。
对于制备质谱级Co-IP样品,我司推荐用SDS-PAGE胶分离、考染观察并切割bait蛋白及其他差异条带进行质谱检测。不推荐直接进行digest on-beads方式进行后续质谱检测分析。