产品简介:
免疫沉淀/免疫共沉淀 (Immunoprecipitation/Co-immunoprecipitation, IP/Co-IP) 是经典地研究蛋白质-蛋白质相互作用 (Protein-Protein Interaction, PPI) 和蛋白质翻译后修饰 (Post-translational Modification, PTM) 的实验技术。
选择适合的裂解液(lysis buffer),既能充分提取蛋白质,同时又能保持蛋白质的天然构象和活性,是进行IP/Co-IP实验的关键。
在IP/Co-IP过程中,非特异性的蛋白质粘附是不可避免的。为了降低非特异性粘附蛋白对后续实验结果的干扰,需选择合适的洗涤液对IP/Co-IP后的产物进行洗涤 (wash),以去除/降低非特异性的蛋白质粘附,提升数据质量。
本公司生产的IP/Co-IP细胞裂解液与洗涤液套装 (#B005),通过配方优化和实验验证,(1) IP/Co-IP细胞裂解液可充分实现对细胞的裂解和蛋白质提取,(2) 提取的蛋白质可直接进行IP/Co-IP,(3) IP/Co-IP洗涤液,可充分去除/降低非特异性粘附,显著提升数据质量;(4) 5 × SDS-PAGE上样缓冲液,可直接用于对IP/Co-IP产物的处理,兼容后续的SDS-PAGE电泳和Western blot检测,极大地提高了实验的便捷性和实验效率。
备注:
本套装产品适合常规的IP/Co-IP实验。对于特殊条件的IP/Co-IP,用户可能需要优化实验条件或参考文献以选择更为合适的IP/Co-IP体系。
本套装仅对细胞系培养体系进行了验证,未对组织样本进行验证。
保存条件:
-20ºC保存,一年有效。
注意事项:
蛋白酶和磷酸酶抑制剂(Protease & Phosphatase inhibitor cocktail)需用户自备。
将B003和B004缓冲液置于4°C冰箱中完全化冻后(可适量分装,避免反复冻融)。
裂解细胞前,根据样品数目计算并取足量完全化冻的B003,按比例加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂,充分混匀后置于冰上备用。
IP/Co-IP洗涤前,根据样品数目计算并取足量完全化冻的B004,按比例加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂,并充分混匀后置于冰上备用。
本产品仅供科研使用!
产品包装:
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
B003 | IP/Co-IP细胞裂解液 | 1*100ML |
B004 | IP/Co-IP洗涤液 | 1*100ML |
B011 | 5x SDS-PAGE上样缓冲液 | 1*2ML |
— | 说明书 | 1份 |
实验数据:
B005用于IP/Co-IP检测。(1) 使用B003裂解转染的细胞并提取蛋白质。(2) 蛋白质提取液用W04 (anti-FLAG magnetic beads)和W05 (anti-HA magnetic beads)分别进行IP。(3) IP产物用B004进行洗涤后,释放蛋白质进行Western blot检测。(4) WB检测所用抗体分别为anti-FLAG-HRP (TA01)和anti-HA-HRP (TA02),这两种抗体直接偶联HRP,不会与FLAG或HA抗体的重链和轻链反应,故而条带清晰,数据质量高。