DMEM是广泛使用的哺乳动物细胞培养基,在培养基中添加了哺乳动物细胞不能自身合成的氨基酸——“必需氨基酸”,如K(Lysine,赖氨酸)和R(Arginine,精氨酸)。在K和R中的元素组成为12C、14N和H1。为了说明方便,我们将普通的K和R分别记为K0和R0。
SILAC(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)培养基是用稳定同位素(13C、15N、2H)标记的K和R替换普通培养基中的K0和R0,在后续的细胞培养过程中,稳定同位素标记的K和R掺入到细胞的每一个蛋白质分子中,从而实现对细胞蛋白质组(Proteome)的标记。
为什么要选取K和R做SILAC标记的氨基酸呢?是因为后续蛋白质在质谱分析之前,要先用胰蛋白酶(Trypsin)将蛋白质“切割”成肽段,Trypsin特异性地从蛋白质的K和R残基处“切割”,最终超过95%的肽段都是以K和R结尾的,将来的质谱定量信息丰富,定量结果更为精准。
为了提高细胞SILAC标记效率,培养所添加的血清必须为透析血清(Dialyzed FBS for SILAC),切勿用普通血清!
*SILAC实验设计组合及氨基酸信息*
SILAC培养基组合选择 | |||
实验组数 | 重标(Heavy,H) | 中标(Medium,M) | 轻标(Light,L) |
2组 | K6R6 | / | K0R0 |
2组 | K6R10 | / | KR0 |
2组 | K8R10 | K0R0 | |
3组 | K8R10 | K4R6 | K0R0 |
*对于2组SILAC实验,有3种组合方式可选,客户可根据项目的具体情况选择合适的培养基组合。 |
SILAC培养基所用氨基酸组成及质量差异比较表 | ||
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轻标氨基酸 (Light,L)/(缩写) | 重标氨基酸 (Heavy,H)/(缩写) | 质量差异(H vs. L) |
Lysine/(K0) | 13C6-Lysine/(K6) | 6Da |
(4,4,5,5-D4)-Lysine/(K4) | 4Da | |
13C6, 15N2-Lysine/(K8) | 8Da | |
Arginine/(R0) | 13C6-Arginine/(R6) | 6Da |
13C6, 15N4-Arginine/(R10) | 10Da |
重要通知:因原材料价格急剧上涨,即日起,以下SILAC培养基Kit的销售价格已调整,请广大用户知悉!
K0R0是对照培养基,除了了K和R之外,其成分与K6R6、K4R6、K6R10、K8R10完全一样,是理想的SILAC实验对照培养基。
D-FBS(Dialyzed FBS),每个Kit配备2x50ml,以保障所用血清成分一样,消除D-FBS不同所引起的可能实验差异。
产品说明书: